AHAのタイミングについて

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  • #990
    アバターeimei
    参加者

    AHAのタイミングについて、皆さまのご意見をお伺いしたいです。

    当院ではAHAを行っていないのですが、患者様の希望があり導入を検討しております。(AHAはPZDで実施予定です。)

    融解直後にAHA実施を検討していましたが、融解直後では約7割程の胚が拡張しておりAHAを行う十分なスペースが無く難しいと感じました。そのため、AHAの手順につきまして以下の2通りを考えています。(融解キットは、北里のものを使用しています。)

    方法1:
    融解後、0.25M Sucrose液(DS:WS=1:1)で収縮させ(3分程を目安に?)AHAを行う。(融解直後十分なスペースが得られた場合はそのままAHAを行う。)

    方法2:
    融解時TS液1分→DS液3分まではプロトコール通りに行い、DS液後に0.25M Sucrose液のAHA用ドロップに胚を移し、そこでAHAを行い(できるだけ短時間で)、その後プロトコール(WS1液5分→WS2液1分)に戻る。(0.25M Sucrose液を中間液として間にはさみ、そこでAHAを行えば良いか?と考えております。)

    融解後に再度収縮させるよりは融解途中の収縮している時期にAHAを行った方が良いものか...?と迷走しております。

    皆さまのご施設ではどのようなタイミングでAHAを行っていますでしょうか、
    また、私共が考えています上記方法での注意すべき点等ありましたらご参考にさせていただけますと助かります。

    どうぞ宜しくお願い致します。

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    #994
    アバターやあ
    参加者

    融解処理過程のDSやWS1の浸漬中にAHAを行っているご施設は、多々あるようです。
    レーザーですと胚のディッシュ移動が必要無いので比較的短時間でいけると思いますが、PZDで実施されているご施設の方がいましたら、様子を教えて頂けると嬉しいです。

    AHAに手間取って、時間が掛かってしまったりしたときは、どの様に対処されているのか気になります。

    質問の追加になってしまいましたが、よろしくお願いします。

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    #998
    アバターじゃん
    参加者

    当院ではnuncの4wellディッシュで融解を行っています。

    AHAの際は4wellの中央部(wellではないです)にWS1液のドロップを作り(チューブから少し垂らす程度です)、その中に胚を入れてAHAを行っています。AHAはPZDです。

    特に収縮用液は使用していません。経験の浅いスタッフでもWS1&WS2の10分以内には終わるので、時間がかかってしまった際の対処についての具体的な対策は経験ないのですが、万一時間がかかりそうであれば、途中で上のスタッフに交代するように考えてはいます。

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    #999
    アバターやあ
    参加者

    じゃん さんへ

    4wellの中央部をAHAに使用するというのは、初めてお聞きしました。別のディッシュを用意しなくてもOKなところは良いですね。

    「WS1&WS2の10分以内」とありますが、もしも4wellの中央部に作製したWS1のドロップで5分以上経過したときは、新しいWS2のドロップに移動しているということですか? それとも、同じWS1のドロップ内で10分まで許容しているということでしょうか?

    よろしくお願いします。

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    #1002
    アバターじゃん
    参加者

    やあさん

    「WS1&WS2の10分以内」とは言ったのですが、過ぎるときは大体1~2分ぐらい(WS1に入れてから6~7分)なので、そのままWS1中でAHAを完了させています。

    もし、10分まるまるかかりそうな場合でも、特にWS2へ移動させることは考えていませんでしたが、どれぐらい時間オーバーしたら問題があるのか(成績に影響あるのか)は検討していないので確かなことはわかりません。しかし、AHAにかかった時間も記録していかなければなと思いました。ありがとうございます。

     

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    #1004
    アバターやあ
    参加者

    じゃんさん、有難うございました。

    凍結融解の各ステップの時間については、施設によってモディファイされている箇所も多々ある様なので、皆さんで情報をシェアできたらいいなあ、と思いました。

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    #1005
    アバターeimei
    参加者

    じゃんさん

    やあさん

    詳しく教えて頂きましてありがとうございます。他施設様の方法を聞くことができ、とても勉強になります。

    検討を重ね、方法2の手順でAHAの練習をしてみましたところ、ハッチングさせることができました。AHAにかかる時間等(今回は3分を目標にしてみました)もさらに練習と検討を重ねていきたいと思ます。

    ありがとうございました。またよろしくお願い致します。

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