培地作成および培養系について

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  • このトピックには4件の返信、2人の参加者があり、最後にKeitにより3週、 2日前に更新されました。
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  • #2689
    Keit
    参加者

    はじめて質問させていただきます。

    現在当院では以下のような培養系を構築しています。

    1. 採卵前日の終業前に前培養シャーレ(オリジオSequential Fert)およびミネラルオイル(扶桑ライトオイル)をインキュベート(90%N2、6%CO2)
    2. 採卵日の朝に培養液(扶桑OVIT Plus等)をラウンドチューブに分注してインキュベート
    3. 採卵後に前日作成の前培養シャーレにて前培養
    4. その間、朝分注の培養液および前日インキュベートのミネラルオイルにより、個別ドロップ培養シャーレを作成
    5. ICSIの場合、穿刺した卵を培養シャーレにて培養開始
    6. IVFの場合、Day0またはDay1裸化後から培養シャーレにて培養開始

     

    上記において、質問が2点あります。

    1. オイルはインキュベートする必要があるのか。培養シャーレ作成時は冷蔵庫から出したオイルで被覆するのではだめなのか。
    2. Day0から培養メディウムにて培養を開始しても良いのか。

     

    ご回答のほどよろしくお願い申し上げます。

    #2693
    やあ
    参加者

    こんにちは。

    培養液ドロップにオイルを被せて直ぐに培養に使用するのであれば、オイルはあらかじめガス平衡が必要だと思います。
    (オイルもガスが透過浸透しますので、ガス平衡されていないオイルを培養液ドロップに被せると、一時的に培養液内の炭酸ガスはオイルに吸収されてしまうと思っています。)

    培養液ドロップにガス未平衡のオイルを被せてインキュベーターに入れた場合、約3時間で培養液のガス平衡が終了すると言われています。したがって、採卵当日の朝に培養用ディッシュを作製して3時間のガス平衡後に胚培養に使用している施設は多数あります。

    ICSIやIVFでの受精後は、受精培養液を介さずに胚培養用培養液に入れて培養するのは、スタンダードな方法だと思います。

    上記の様に考えますが、反対意見やご不明な点とかあれば、遠慮なく聞いてください。

    #2696
    Keit
    参加者

    ご回答ありがとうございます。

     

    >>培養液ドロップにガス未平衡のオイルを被せてインキュベーターに入れた場合、約3時間で培養液のガス平衡が終了すると言われています。したがって、採卵当日の朝に培養用ディッシュを作製して3時間のガス平衡後に胚培養に使用している施設は多数あります。

     

    一般的に、採卵の準備は当日朝に行っているものなのでしょうか?

    当院では前培養ディッシュを前日終業前に、検卵後に胚培養ディッシュ(インキュベートしたメディウムおよびオイルを使用)を作成しているのですが、ガス平衡が3時間で済むのなら胚培養ディッシュの作製は当日朝でも良さそうな気がします。

    なお、この場合は冷蔵庫から出した培養液およびオイルを使用して培養用ディッシュを作成すると思いますが、予想採卵数を超えて卵が獲得できた場合など、追加で培養用ディッシュを作成する必要がでてきた際にはどのように対応しているのでしょうか?

     

    >>ICSIやIVFでの受精後は、受精培養液を介さずに胚培養用培養液に入れて培養するのは、スタンダードな方法だと思います。

    ICSI施行後やIVFのDay0裸化後から受精培養液を介さずに胚胚培養培養液で培養を始めても良いものなのですね。勉強になりました。

     

    重ねて質問してしまい申し訳ありませんが、ご回答の程よろしくお願い申し上げます。

    #2697
    やあ
    参加者

    一般的と言えるかどうか、そこまで多くの施設を知ってる訳では無いので私は分かりません。

    私の知ってるご施設では、採卵後に卵数を確認してから作製してます。

    ただそれだと忙しい時は、予想して先に作ってしまうこともあるそうです。

    #2698
    Keit
    参加者

    ご回答ありがとうございます。

    培養ディッシュ作成について、採卵当日朝あるいは検卵後のどちらがいいのか試行してみようと思います。

     

    ご教授いただきありがとうございました。

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