補助培養液について

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  • このトピックには9件の返信、2人の参加者があり、最後にみゅーにより8ヶ月前に更新されました。
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  • #2111
    みゅー
    参加者

    お世話になっております。

    当院は、加湿型の透明なボトルタイプのインキュベーターを使用していて、ディッシュをいれる下の補助培養液を、ガスが流れると色がピンクからオレンジに培養液と同じように変化するものを購入していました。その補助培養液が販売中止になり、注射用水で対応していましたが、最近の培養液はフェノールレッド入りのものが減り、やはり、pHが色でわかるものにしたいと思いました。

    培養液メーカーさんに聞いて、注射用水ではなく、炭酸水素Na1.26%にフェノールレッドを加えて作るといいと聞いて、やってみましたが、ガスを流してもピンクのままです。どうしてでしょうか。

    #2112
    やあ
    参加者

    炭酸水素Na溶かしただけではダメな気が。。。

    要は培養液を作製すればよいのですよね。HTFとかTYHとかを作製するのが比較的簡単ですが。

    でも、できるだけ単純な組成がいいでしょうから、どんなものを作製すればよいか培養液の専門家にご質問してみます。

    しばしお待ちを。

     

    #2113
    みゅー
    参加者

    ありがとうございます。何か月も悩んでいたので、すごくありがたいです。

    #2118
    やあ
    参加者

    培養液の専門家の方からご返事頂いました。

    通常、胚培養液には25 mMのNaHCO3(0.21 g/100 mL)を加えていますので、1.26%というのは、計算上培養液と同じpHにはならないとのことです。

    pH = 6.1 + log10(150/(0.03*760*0.06)) = 8.1

    なので、1.26%の炭酸水素Naなら6%のCO2環境下では理論上pH=8.1になるとのことです。

    ただ、8.1ならアルカリ性に傾いているので、フェノールレッドの色は赤紫系になるはずですし、オレンジというのは酸性側に傾いている気がするので、よく分かりませんね?
    もしかして、買われていた溶液って、水にフェノールレッド入れていただけってことないですかねえ?
    (↑試したら、水にフェノールレッド入れた時点で黄色くなってしまいました。)

    通常の培養液と同じくらいの炭酸水素Na(0.21 g/100 mL)で、ちょっと試してみますので、 またご報告します。

    #2119
    やあ
    参加者

    炭酸水素Na 25mM(0.105g/50mL)に市販 0.5%フェノールレッド溶液 100µL加えて、5% CO2インキュベーターに入れて、約5時間後に写真撮影しました。

    私は炭酸水素Naだけではダメだと思っていましたが、間違えでした。炭酸水素Naだけでフェノールレッドの色(pH)確認できますね。

    左:大気中に放置
    右:5% CO2内 5時間平衡後

    これは、一般的な培養液の色と同じくらいだと思います。
    そちらで以前に使っていた市販品の色と比べてどんな感じですか?

    (ちなみに、水にフェノールレッド溶液だけ添加したら、真っ黄色になってしまい、インキュベーターに入れても、もちろん黄色いままの溶液になってしまいました。)

    #2120
    みゅー
    参加者

    実験までしていただき、本当にありがとうございます。

    数学が得意な人がいなくて、計算ができないのですが、、、

    当院が購入したフェノールレッド溶液は、0.04w/v%ですが、使用できますか?

    炭酸水素Na1.26%を1箱購入してしまい、注射用水で何倍かに薄めれば使用できますか?

    度々すみません💦

    #2121
    みゅー
    参加者

    撮っていただいた写真のように、以前の補助培養液はなっていました。

    #2122
    やあ
    参加者

    私がやったのと同じ色になれば良いのでしたら、炭酸水素Na 1.26 w/v%と精製水を1:5で混ぜれば、0.21 w/v%になって、培養液と同等の炭酸水素Na濃度になるのではないかと思います。

    0.04w/v%フェノールレッドの製品は使用したことないので分かりませんが、要は自分が確認できるだけの色が付けばOkなので、私が入れた量の10倍くらい入れれば良いのかもしれません。
    そうすると、200µL/100mLくらい入れましたから、10倍だと2mL/100mLくらいですかね。
    ただ、フェノールレッドが何の溶液で溶解されているか分からないので、その影響はあるかもしれませんので、とにかく一度お試しになってみて下さい。

    まとめると、炭酸水素Na 1.26 w/v% 10mL + 精製水 48.8mL +0.04w/v%フェノールレッド 1.2mL = 合計60 mL

    合ってますかね?

    色が薄いようなら、フェノールレッドの量を増やして、その分精製水を減らしてください。

    #2124
    みゅー
    参加者

    了解しました。ありがとうございました。

    #2147
    みゅー
    参加者

    報告が遅れてしまい、すみません。教えていただいたように、補助培養液を作り、ガスを流すとオレンジに変わる希望の補助培養液ができました。ありがとうございました。

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